WWW.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 

Pages:     | 1 |   ...   | 15 | 16 || 18 | 19 |   ...   | 21 |

«Российская академия сельскохозяйственных наук Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Российской академии сельскохозяйственных наук ...»

-- [ Страница 17 ] --

Коробова, 2007). Для разработки эффектив ния и развития взаимоотношений обусловливаю- ных мер консервации и реставрации исторической щих его различных организмов. Иными словами, древесины конструкций необходимо знать, какие структурно-функциональная организация процес- комплексы микро- и макромицетов развиваются са биодеструкции исторической древесины пред- на них и какие процессы происходят в субстрате ставляет собой совокупность гетеротрофных не- при активном развитии последних. Из всего вы кробионтных консорций, развивающихся путем шесказанного цель исследования: охарактеризо биоконверсии с последовательной передачей орга- вать особенности микосинузий и их воздействия нического вещества и энергии, с постоянным сни- на деревянные конструкции исторических зданий жением энергетического потенциала. (Kalamees, Санкт-Петербурга. Для достижения поставлен 1971;

Селиванов, 1974;

Беломесяцева, 2004). Ми- ной цели решали задачи по идентификации ми кроорганизмы, осуществляющие биоконверсию кобиоты деревянных стропильных конструкций в консорциях исторической древесины (наибо- 6-ти исторических зданий г. Санкт-Петербурга;

лее значимые микро- и макромицеты), простран- характеристике особенностей видового состава части складывающейся экосистемы определенно- рактеристике активно разрушающих комплексов го видового состава и экологии — микосинузии — микобиоты деревянных конструкций на разных сортивных взаимоотношений от комменсализма (1750–1758 гг.), Собор Святой Живоначальной до угнетения или прямого паразитизма (Сукачев, Троицы Лейб-гвардии Измайловского полка 1972;

Титова, 2000 а;

Беломесяцева, 2004). Структу- (Троицкий собор) (1828–1835 гг.), Казанский со ра микосинузий специфична и относительно ста- бор (1801–1812 гг.), Китайский дворец комплекса бильна для каждого ядра консорции (вида строи- «Ораниенбаум» (1762–1768 гг.), Каменноостров тельной исторической древесины и конструкции), ский Императорский театр (1827 г.) и здание Го специфичны ее динамика и динамика взаимоотно- стиницы на Садовой улице (1872–1874 гг.). В рабо шений в микосинузиях (Титова, 2000 б;

Воронин, те применяли как классические, так на некоторых Рисунок 1. Структура микосинузий некробионтных консорций исторической древесины: a – Благовещенская церковь;

b –Троицкий со бор;

c – Казанский собор;

d – Китайский дворец комплекса "Ораниенбаум";

e – Каменноостровский Императорский театр;

f – здание Гостиницы.

Figure 1. Mycosinusiae' structure in necrobiont consortiums on the historical wood: a – Annunciation Church;

b – the Holy Trinity Cathedral;

c – Kazan' Cathedral;

d – Chinese Palace;

e – Caesarean Theatre;

f – Hotel Building.

Титова Ю. А., Серова Т. А. Микосинузии некробионтных консорций исторической древесины памятников архитектуры Санкт-Петербурга.

объектах и молекулярно-генетические методы вы- колонизации уровне за счет собственных метабо деления и идентификации грибов, качественного лических процессов, продолжали свое развитие и количественного учета макро- и микромицетов, и колонизацию доступной и подготовленной для В результате микологического анализа пора- поверхностные и более глубокие слои последних женных образцов древесины стропильных кон- (Свиридова и др., 2001;

Серов и др., 2004;

Семенко струкций Благовещенской церкви выявлено 24 ва, 2008). Колонизируя древесину с поверхности вида микромицетов, Троицкого собора — 28 ви- при благоприятных условиях, микромицеты под дов микромицетов, Казанского собора — 10 видов готавливают ее и для колонизации макромицетом.

макро- и микромицетов, Китайского дворца — 25 Поэтому макромицет может поселиться не только видов макро-, микро- и миксомицетов, стропиль- в местах агрессивного воздействия влаги на древе ных и этажных конструкций Императорского сину, но и в тех местах, где происходит интенсив театра — 53 вида представителей микобиоты, ная колонизация субстрата и успешное развитие здания Гостиницы — 49 видов макро- и микро- микромицетов на нем. При биоконверсии древе мицетов. Микобиота представлена, в основном, сины с участием макромицета–эдификатора (с мезофильными видами грибов, способными плотностью популяции 6–30 %) происходило не к сапротрофному (некротрофному) существова- которое уменьшение видового разнообразия ми нию на мертвых древесных субстратах. Наиболь- косинузий (Титова, 2000 б;

Коробова, 2007) (Рис.

шее число видов относили к порядкам Eurotiales 1). При биодеструкции макромицетом древесины и Hypocreales. Сравнение таксономических ха- формируется трофическая база для нового увле рактеристик показало высокую степень сходства чения разнообразия и численности микромице микобиоты всех обследованных зданий. В зави- тов. На последней стадии разрушения древесины симости от степени биодеструкции древесины видовое разнообразие также снижается. На тро и условий нахождения элементов конструкций на фической базе со значительной минерализацией них формировались различные комплексы коло- органических компонентов субстрата способны низаторов, формирующих микосинузии различ- развиваться лишь немногие виды и группы ми ных стадий биодеструкции древесины. Для всех кромицетов (Schmidt, 2007). Направление сук конвертирующих древесину комплексов харак- цессии обусловливали антагонистические от терно присутствие видов Penicillium (3–35 видов) ношения микромицетов между собой, а также с высокими значениями частоты встречаемости макромицета по отношению к подавляющему и плотности популяции (Смоляницкая, 2007). Все числу микромицетов.

стадии биодеструкции характеризуется преобла- Таким образом, наблюдали сходство микоси данием видов Penicillium, Aspergillus и Fusarium, нузий к консорциях деревянных конструктивных совокупная доля которых в микосинузиях элемен- элементов различных исторических зданий. Вы тов с поверхностной колонизацией древесины со- явлена тенденция к конвергенции при формиро ставлял 43–76 % то есть около половины и более вании комплекса доминантов в начале и конце колонизирующих элемент микромицетов (рис. 1). сукцессии микосинузий (Коробова, 2007). Началь Максимальный пул этих микромицетов в об- ную и завершающую фазу некробионтной сук разцах древесины конструкций 105–106 КОЕ/г цессии исторической древесины обусловливали свидетельствует об их участии в биодеструкции лигнофильные синузии грибов, представленные древесины. В некробионтной консорции в благо- преимущественно, гифомицетами и анаморфа приятных условиях формировались микосину- ми аскомицетов. Между этими крайними фазами зии, которые, сохраняя влажность поверхностных в большинстве случаев протекал период воздей слоев древесины на достаточном для дальнейшей ствия афиллофоровых грибов.

Литература Беломесяцева Д. Б. Микобиота в консорции можжевельника в Беларуси. Минск, ИООО «Право и экономика, 2004, 236 с.

Воронин Л. В. Сукцессии комплексов грибов на отмерших растительных субстратах в малых озерах Ворку тинской тундры // Микол. и фитопатол., 2007, 41, 5, с. 403–412.

Коробова Л. Н. Особенности сукцессии микробных сообществ в черноземах западной Сибири. Автореф дисс… доктора биол. наук. Новосибирск, 2007, 43 с.

Свиридова О. В., Михалева Л. В., Воробьев Н. И., Кочетков В. В. Разложение коры хвойных деревьев грибами и бактериями. // Микол. и фитопатол., 2001, 35, 1, с. 38–47.

Селиванов И. А. Некоторые вопросы учения о консорциях // Микориза и другие формы растительных консор ций. Ученые записки Пермского пед. ин-та, Пермь, 1974, 133, с. 5–14.

Семенкова И. Г. Фитопатология. Дереворазрушающие грибы, гнили и патологические окраски древесины (определительные таблицы): учеб. пособие. М., ГОУВПОМГУЛ, 2008, 72 с.

Серов А. Е., Серов Е. Н., Лабутов С. А., Титова Ю. А. Основные результаты обследования конструкций кры ши Казанского собора // Актуальные проблемы современного строительства. 56-я Междунар. научн. конфе рен. молодых ученых. Сборник докладов. Ч. I. СПб, 2004, с. 32–37.

Смоляницкая О. Л. Микромицеты как потенциальные агенты биоповреждения культурных ценностей и стратегия защиты от них в Государственном Эрмитаже. Автореф. дисс... кандидата биологических наук.

СПб, 2007, 2 с.

Сукачев В. Н. Избранные труды: В 3 т. М., Наука, 1972, Т. 1, 418 с.

Титова Ю. А. Микобиота на различных стадиях морфогенеза Agaricus bisporus // Микол. и фитопатол., а, 34, 2, с. 32–39.

Титова Ю. А. Микосинузии различных сортов шампиньона двуспорового Agaricus bisporus// Микол. и фито патол., 2000 б, 34, 4, с. 25–32.

Kalamees К. Theoretical aspects of mycocoenology // Известия АН ЭССР, 1971, 20, с. 2–7.

Schmidt O. Indoor wood-decay basidiomycetes: damage, causal fungi, physiology, identification and characterization, prevention and control // Mycol Progress, 2007, 6, p. 261–279.

MYCOSINUSIAE IN NECROBIONT CONSORTIUMS

ON THE HISTORICAL WOOD OF ST.-PETERSBURG'S

ARCHITECTURE MONUMENTS

All-Russian Institute of Plant Protection (VIZR), St.-Petersburg, Russia, juli1958@yandex.ru Mycosinusiae' peculiarities and their influences on carpentry of 6 St.-Petersburg's historical buildings, constructed in XVIII-XIX centuries are characterized. All the biodegradation stages were characterized by the prevalence of Penicillium, Aspergillus and Fusarium species, the maximal pool of these micromycetes in the wood samples up to 105–106 colony forming units/g indicates on their participation in biodegradation. It is shown, that by wood degrading from its surface, micromycetes prepare it for macromycete colonization. Similarity in mycosinusiae from carpentry's necrobiont consortiums of various historical buildings and the tendency to convergence is revealed in dominant complex formating at the beginning and at the end of mycosinusiae's succession. The initial and finishing necrobiont succession's phases on historical carpentry were provided by lignophilic fungi' sinusiae, with hyphomycetes and ascomycete anamorpha appeared in their structure. Between the extreme phases the period of aphyllophoroid causal fungi influence in the most cases proceeded.

Key words: mycosinusiae, lignophilic sinusiae, necrobiont consortiums, biodestruction of wood, wood biorecycling (bioconversion), successions.

ВКЛАД А. А. ЯЧЕВСКОГО В ИЗУЧЕНИЕ БОЛЕЗНЕЙ

ВЫРОЖДЕНИЯ КАРТОФЕЛЯ

Работа А. А. Ячевского по изучению болезней вырождения картофеля, которые вскоре были признаны как вирусные, явилась фактически первой в нашей стране, имела важное значение для развития научных исследований в этом направлении и, в целом, для отечественного карто фелеводства.

Ключевые слова: ученый, фитопатология, картофель, вирусы.

Трускинов Э. В. Вклад А.А. Ячевского в изучение болезней вырождения картофеля.

В 1925 г. Центральный Союз Картофельной природа которых, как теперь известно, совершен Кооперации (Союзкартофель) выпустил брошюру но иная и может быть отнесена к физиологиче А. А. Ячевского «Болезни вырождения картофеля ским, функциональным болезням не инфекцион по данным обследования 1924 г.». Опубликована ного происхождения. Относительно же болезней она была как отдельный материал к трудам 1-го вырождения уже тогда было понятно, что они Агрономического совещания картофельной коо- заразны. Следует отметить, что в иностранной перации при Союзкартофеле 15–18 декабря 1924 г. литературе 20-х годов название вирусы как фито Летом того года Правление Союзкартофеля обра- патогены еще не используется. Впервые они по тилось к А. А. Ячевскому с предложением орга- являются в названиях работ Кваньера (Quanjer), низовать обследование состояния картофеля как Саламана (Salaman), Смита (Smith), лишь в 30-е на полях опытных учреждений и кооперативных годы прошлого века. Только в 1935 г. появилась семхозов, так и в наиболее типичных районах его работа У. Стэнли по выделению очищенного кри возделывания. Это предложение им было принято сталлического препарата вируса табачной мозаи и осуществлено с помощью сотрудников Миколо- ки. В русскоязычной литературе впервые вирусы гической Лаборатории Л. Ф. Русакова, И. И. Абра- растений упоминаются в 1934–1935 гг. в работах мова и др. О результатах было доложено уже в де- В. Л. Рыжкова и К. С. Сухова. Так что, А. А. Ячев кабре на совещании. По просьбе А. А. Ячевского он ский отдает дань лишь той терминологии, кото получил от С. М. Букасова клубни 76 сортов. Отдел рая была тогда принята в научной литературе.

прикладной ботаники и селекции, где тот работал, Прекрасно зная ее, он был осведомлен, навер входил тогда в Государственный институт опыт- ное, о работах Д. И. Ивановского и М. Бейеринка ной агрономии (ГИОА). В том же институте рабо- с мозаичной болезнью табака и открытием филь тал и А. А. Ячевский, возглавляя Отдел микологии трующегося вируса. Тем не менее, предполагать и фитопатологии. В 1925 г. Отдел по прикладной участие этого патогена в вырождении картофеля, ботанике и селекции во главе с Н. И. Вавиловым он, видимо, не имел тогда оснований, или просто выделился в самостоятельный Всесоюзный инсти- остерегался неверных заключений.

тут прикладной ботаники и новых культур (ВИПБ Несмотря на неясность происхождения этих и НК), в 1930 г. получивший название Всесоюзный болезней, сделанное А. А. Ячевским описание их институт растениеводства (ВИР). симптоматики настолько подробное и точное, что Переданные на испытание сорта были выса- вполне может быть использовано и в настоящее жены на опытном участке Станции защиты расте- время. Среди них два типа скручивания листьев ний в Петергофе. Кроме того, были обследованы (типичное и краелистное) и семь типов мозаики.

посадки картофеля еще в 9 местах: Кореневская Конечно, все это почерпнуто из имевшихся тогда, опытная селекционная станция (под Москвой), в основном зарубежных, научных работ, где были опытный участок Станции защиты растений в По- досконально изучены признаки вирусного, как дольском уезде Московской губернии, Калитин- мы теперь знаем, поражения картофеля, выявле ский селекционный питомник, близ станции Ка- ны инфекционная его природа и пути заражения.

литино Балтийской железной дороги, Бабаевский Кроме знания этих исследований по публикациям, картофельный рассадник Союзкартофеля, Шун- А. А. Ячевский имел возможность лично познако генская волость, Сумароковское опытное поле (все миться с некоторыми их авторами, в частности три в Костромской губернии), Казанское опытное с доктором В. А. Ортоном (W. A. Orton), во время поле, селекционная станция Эстачи (близ Казани) поездки вместе с Н. И. Вавиловым в США в 1921 г.

и Бутылицкое опытное поле во Владимирской гу- Будучи директором Института растениеводства бернии (близ Мурома). Во всех этих пунктах были в Вашингтоне, В. А. Ортон был известным специ проведены обследования и получены соответству- алистом по болезням вырождения картофеля. Оз ющие данные, доложенные затем на совещании накомившись с работами американских коллег, и опубликованные в следующем году. А. А. Ячевский пишет: «Побывав в Америке в Обращает на себя внимание и требует поясне- году, мне не трудно было установить, что мозаи ния, почему те болезни картофеля, которые при- ка существует у нас и представлялось необходи нято теперь считать вирусными, в заглавии и тек- мым немедленно же приступить к обследованию сте брошюры значатся как болезни вырождения. распространения этой болезни на нашей террито О вирусах здесь пока ни слова, о происхождении рии». Такое обследование ему представилось воз этих болезней А. А. Ячевский высказывается как можным осуществить лишь через три года.

о весьма загадочном явлении, используя, вместе Несмотря на определенное заимствование из с тем, термин патологическое вырождение, де- уже известных иностранных работ, работу, про генерацию, распространенный в то время в ино- деланную А. А. Ячевским и его сотрудниками, странной литературе. Он определенно предпо- с полным правом можно считать первой и ори читает его такому, как энзиматические болезни, гинальной по картофелю у нас в стране, и в этом смысле — классической, на которую стоит ссы- подавляющее число сортов картофеля ввозилось латься и нынешним исследователям. Во-первых, из-за границы. Первыми отечественными сорта по охвату сортов, а во-вторых, по охвату террито- ми были Лорх и Кореневский. Это напрямую вы рий, на которых они испытывались. Среди сортов, текало из сделанных им тогда наблюдений, что полученных от С. М. Букасова и высаженных в Пе- наиболее вырожденным оказывался зарубежный тергофе, не проявили признаков болезни лишь 8 материал, тогда как «местные сорта, разводимые сортов (15,2%). С симптомами скручивания ли- только в отдельных районах, оказались совершен стьев оказалось 56 сортов (74%), с различными но здоровыми, либо слабо зараженными». Особое типами мозаики — 41 сорт (55%), с признаками внимание должно быть уделено также сеянцам, яв полной угнетенности — 6 сортов. Сюда входили, ляющимся «надежным исходным материалом без очевидно, и сорта, которые росли и до получения первичного заражения», что, как уже тогда было от С. М. Букасова. Что касается 8 здоровых со- известно, связано с фактом не передачи инфекци ртов, то при нынешних возможностях диагности- онного начала вырождения (вирусов) семенами.

рования вирусов, они, скорее всего, могли иметь Следует также отметить, что им, наряду с бо и скрытую инфекцию, т. е. были толерантными лезнями собственно вырождения, уделялось так к инфекции. Подобные же данные приведены и по же внимание и другим заболеваниям картофеля.

другим участкам. На основании сводных данных Уже тогда А. А. Ячевским закладывались опреде более устойчивыми оказались сорта Знич, Княже- ленные фитопатологические основы семеновод ская корона, Император, Новый император, Ран- ства этой экономически столь важной, но очень ний розовый, Рояль Кидней, Силезия, Элла, Эпи- болезненной культуры. В статье приводится свод кур, Свитезь. Последние три сорта сохраняются ка максимальных норм допустимости признаков в коллекции ВИР до сих пор, также как и Ранний заболевания. По болезням вырождения они не розовый или Ранняя Роза (Early Rose). При этом должны превышать 5% (по нынешним нормам до А. А. Ячевский не считает возможным делать каки- 10% у сертифицированного картофеля). По фито е-то окончательные выводы об устойчивости пе- фторе и раку клубней — 0%. Все его рекоменда речисленных сортов на основании обследования ции были учтены участниками 1-го Агрономиче одного года, тем более, что по разным участкам ского совещания по картофелю. В его резолюции данные зараженности порой не совпадали. первым пунктом было: «Скорейшее напечатание А. А. Ячевский делает ряд обобщающих и име- доклада проф. А. А. Ячевского «О болезнях вы ющих важное значение выводов, касающихся, рождения картофеля», а также скорейшее издание в основном, сугубо практических советов, кото- его плаката-листовки на ту же тему, доступного рым не лишне следовать и в наше время. Многие для широких масс населения», а третьим — «При из них были претворены в жизнь, но кое в чем нимая во внимание громадное значение для рус пренебрегались, особенно в последние годы. Сре- ского картофелеводства обследования картофеля, ди его предостережений по-прежнему актуально, произведенного по поручению Союзкартофеля в частности, следующее: «В особенности осторож- проф. А. А. Ячевским летом 1924 г., а так же ис но следует относиться к посадочному материалу, ключительную ценность собранного при этом выписываемому из заграницы, требуя при отправ- материала, Совещание считает необходимым про ке свидетельств о фитопатологическом контро- должение начатой работы в дальнейшем».

ле. Этот материал лучше ставить на испытание Была ли продолжена эта работа лично в отдельных участках». Уже тогда он понял, что А. А. Ячевским нам не известно, но то, что она основным путем занесения инфекции является явилась первым и очень важным шагом в этом зарубежный селекционный материал. В то время направлении не подлежит никакому сомнению.

Литература Ячевский А. А. Болезни вырождения картофеля по данным обследования 1924 года. Союзкартофель, Москва, 1925.

CONTRIBUTION OF A. A. JACZEWSKI IN THE STUDY

OF POTATO DEGENERATION DISEASES

N. I. Vavilov All-Russion Institute of Plant Industry (VIR), St.-Petersburg, Russia, truskinov@yandex.ru The work of A. A. Jaczewski for inspection of potato degeneration diseases, which were soon recognized viruses, was actually the first in our country. It was crucial to development of scientific researches in this direction and potato industry in general. Key words: scientist, plant pathology, potato, viruses.

Тухбатова Р. И., Алимова Ф. К.

Видовое разнообразие грибов рода Trichoderma в палеопочвах и их современное применение.

ВИДОВОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ГРИБОВ

РОДА TRICHODERMA В ПАЛЕОПОЧВАХ

И ИХ СОВРЕМЕННОЕ ПРИМЕНЕНИЕ

Было исследовано разнообразие грибов рода Trichoderma в палеопочвах на территории Респу блики Татарстан. Было выделено 135 изолятов этих грибов, которые идентифицировали по мор фологическим признакам, молекулярно-генетическому анализу ITS-областей рДНК и с исполь зованием объектно-ориентированного подхода. Дополнительно были изучены ферментативная, фитотоксическая и антагонистическая активности выделенных штаммов.

Ключевые слова: ITS, культурально-морфологический тип, фитотоксичность.

Известно, что ответственными за плодородие oblongisporum, T. viride, T. koningii, T. asperellum, и супрессивность почв являются представители T. saturnisporum, T. spirale. Также нами была выде рода Trichoderma (Harman, 2004). Погребенные лена группа новых, неидентифицируемых изоля почвы являются природными резервуарами со- тов. Морфологический анализ с использованием хранения численности и видового разнообразия АСМ-микроскопии позволил выделить изоляты видов рода Trichoderma, где частота встречаемо- одного вида (T. asperellum) с разными по структу сти составляет более 60%. Современные горизон- ре поверхностями: от гладкой из гидроморфного ты характеризуются снижением частоты встреча- горизонта до шероховатой из автоморфного.

емости (0–7%) и видового разнообразия (менее В большинстве случаев изоляты представле Нами были исследованы образцы палеопочв ние общих частот реакций совместимости (63%) из Мурзихинского II могильника (8–6 вв. до н. э., и несовместимости (37%) указывает на наличие Алексеевский район Республики Татарстан), Боль- тенденции относительного сдвига в сторону ре ше-Кляринского городища (9–11 вв. н. э., Кам- акций смешанного типа и вегетативной совме ско-Устьинский район Республики Татарстан) стимости. Исследование кинетических параме и современных горизонтов в этих районах. Из ис- тров при различных температурах позволило следованных почв нами было выделено 135 изоля- выявить изоляты с различной стратегией жизни:

Выделенные изоляты были идентифициро- холодостойкие (10–14°С) и мезофильные виды ваны по морфологическим признакам, молеку- (25–28°С) с высокой антагонистической актив лярно-генетическому анализу ITS-областей рДНК ностью к фитопатогенам и ростстимулирующей и с использованием объектно-ориентированного активностью в отношении яровой пшеницы. При подхода — новый формат описания морфоло- изучении взаимоотношений с растениями вы гических признаков (Тарасов, 2007). Нами была явлены хозяин-специфичные и органотропные предпринята попытка построения новой систе- виды с различной степенью положительного и от матики рода Trichoderma по формализованным рицательного воздействия на растение. Выявлены морфологическим и фенотипическим призна- виды — симбиотрофы бактерий рода Azotobacter.

кам. Иерархическая систематическая модель при Для отдельных видов отмечено положительное использовании в практических целях обладает влияние на азотфиксирующую активность черно рядом преимуществ: ее использование ускоряет зема на 14 день после интродукции: максимальное процесс идентификации изолятов и уменьшает увеличение азотфиксации при внесении 2 изоля число ошибок. Программа была использована тов T. citrinoviride (по сравнению с контролем в нами, наряду с морфологическими, культураль- раза). Положительное влияние на респираторную ными и молекулярно-генетическими признака- активность показано для T. koningii, T. asperellum ми, для построения классификации изолятов (превышение контроля в 2,5 раза) и T. harzianum Trichoderma, выделенных из погребенных почв. (в 3 раза).

В погребенных почвах было выделено 17 видов Изоляты рода Trichoderma, выделенные из па Trichoderma. Наиболее распространенным и ча- леопочв, характеризуются высокой целлюлазной, сто встречающимся оказался вид T. citrinoviride. протеазной и ксиланазной активностями. Мак На втором месте по распространенности стоит симальная целлюлазная активность установлена T. longibrachiatum, на третьем — T. atroviride. у изолята Trichoderma spp. 328 и составила 1, Далее следуют T. harzianum, T. hamatum, T. IU/ml, максимальная протеазная активность у изо лята Trichoderma spp. 323 и соответствует 229,7508 гибирующее. Использование в составе питатель IU/ml, максимальная ксиланазная активность ной среды при культивировании T. аsperellum у Trichoderma spp. 302 и составила 8,8173 IU/ml. источников углерода маннита и этилового спирта В состав аборигенных изолятов Trichoderma, оказало стимулирующее действие на рост корней входят гетерогенные и моноспоровые клоны, и проростков (длина, сырая и сухая масса) и про представленные двумя культурально-морфологи- растание семян пшеницы сорта «Люба», а исполь ческими типами (II, IV). Моноспоровые изоляты зование сахарозы — ингибирующее.

рода Trichoderma, выщепляющиеся из гетероген- При исследовании влияния культуральной ных популяций, характеризуются более высокой жидкости различных изолятов Trichoderma на антагонистической активностью по отношению рост и развитие проростков и корней пшеницы к Fusarium oxysporum, преобладанием вегетатив- сорта «Люба» отмечена следующая закономер ного типа несовместимости и высоким гидролаз- ность: наибольшее количество фитотоксических Изучение вегетативной совместимости, кон- сичные, 34% — стимуляторы, 13% — нейтраль курентоспособности, кинетических параметров, ный тип воздействия), затем — из погребенных антагонистической активности позволило выя- почв городища (42% — токсичные, 38% — сти вить стратегии жизни изолятов Trichoderma из муляторы, 20% — нейтральный тип воздействия).

погребенных почв. Популяционная структура Среди изолятов современных горизонтов почв видов характеризуется тенденцией к увеличению обнаружены виды, как со стимулирующим (55%), клонов с k-стратегией в ходе эволюции, что ука- так и нейтральным (16%) и отрицательным (31%) зывает на переход в ходе сукцессии от молодых типами воздействия на растения.

экосистем к более зрелым и снижению видового Фитотоксическое действие изолятов из погре При исследовании интродукции видов синообразования у эндогенных фитопатогенных Trichoderma в выщелоченный чернозем было микроорганизмов семян, сортовыми особенностя показано, что наибольшее достоверное влияние ми современных зерновых культур и конкуренци на азотфиксирующую активность почвы оказы- ей с растением за питательные вещества в почве.

вают изоляты видов T. asperellum 211 (из погре- Усиление токсинообразования фитопатогенным бенных почв Больше-Кляринского городища) микроорганизмом Fusarium sp. при обработке се и T. citrinoviride 319 (из погребенных почв Мурзи- мян микроорганизмами-антагонистами отмечал Биотический аспект изучения Trichoderma ствие контакта с растениями в глубинных слоях предполагает обязательное изучение ее взаимоот- почвы привело к селекции изолятов с k-страте ношения с эдификаторами, которыми являются гией жизни, мощным гидролазным комплексом Главным регулирующим фактором типа вза- менными сортами растений.

имоотношений является спектр метаболитов, вы- Изучение антигенных свойств при выращи деляемых растением, вид растения, стадия онтоге- вании T. asperellum 302, выделенной из погре неза, физико-химические свойства почв, а также бенной почвы, и T. asperellum 18, выделенной из спектр возбудителей внутренней инфекции. От- современного горизонта, на жидкой среде Чапека, мечена зависимость типа воздействия на расте- показало, что при примерно одинаковом выхо ние от концентрации метаболитов Trichoderma де сухой биомассы на объем питательной среды, и типов источника азота и углерода в питатель- T. asperellum 18 в составе экстрагируемых антиге ной среде. Эффект разведения вызывал разнона- нов содержала большее количество белков и угле правленный эффект на растения от стимуляции водов, чем T. asperellum 302. Поскольку именно до ингибирования роста и развития. Использова- экстрагируемые антигены грибов содержат наи ние в составе питательной среды при культивиро- большее количество аллергенов, это позволяет вании T. аsperellum 302 источников азота NaNO2 предположить, что потенциально T. asperellum и KNO3 оказало стимулирующее действие на 302 является источником меньшего количества рост корней и проростков (длина, сырая и сухая веществ, способных вызывать аллергические ре масса) и KNO3 на прорастание семян пшеницы акции, по сравнению с T. asperellum 18.

сорта «Люба», а использование (NH4)2SO4 — ин Литература Алимова Ф. К. Биологическое разнообразие видов рода Trichoderma (Fungi, Ascomycetes, Hypocreales) и их роль в функционировании микробиоты и защите растений в агроценозах различных почвенно-климатических Уразбахтина Д. Р., Егоршина А. А., Хайруллин Р. М. Анализ способности ферментных систем эндофитных штаммов Bacillus subtilis к деструкции микотоксинов грибов рода Fusarium.

зон на территории Республики Татарстан: дис. докт. биол. наук 03. 00. 07;

06. 01. 11. Защищена 22. 06. / Ф. К. Алимова;

Казанский гос. ун-т. Казань, 2006, 406 c.

Монастырский О. А. Токсинообразующие грибы, паразитирующие на зерне // Агро ХХI, 2001, 11, с. 6–7.

Тарасов Д. С. Компьютерный метод систематики микроорганизмов на основе алгоритмической теории ин формации и его приложение к таксономии и номенклатуре микроскопических грибов рода Trichoderma: дис.

канд. биол. наук 03. 00. 07 / Д. С. Тарасов;

Казанский гос. ун-т. Казань, 2007, 100 c.

Harman G. E. Trichoderma species — opportunistic, avirulent plant symbionts / G. E. Harman, C. R. Howell, A.

Viterbo, I. Chand, M. Lorito // Nat. Rev. Microbiol., 2004, vol. 2, 1, p. 43-56.

SPECIES DIVERSITY OF FUNGI OF THE GENUS TRICHODERMA

IN PALEOSOILS AND THEIR MODERN APPLICATION

Diversity of fungi of the genus Trichoderma in Tatarstan was studied. 135 Trichoderma strains were isolated from these soils and identified by morphological characteristics, molecular-genetic analysis of ITS regions of rDNA and using object-oriented approach. Additionally enzyme, phytotoxic and antagonistic activity of isolated strains been studied.

Key words: ITS, culture-morphological type, phytotoxity.

АНАЛИЗ СПОСОБНОСТИ ФЕРМЕНТНЫХ СИСТЕМ

ЭНДОФИТНЫХ ШТАММОВ BACILLUS SUBTILIS

К ДЕСТРУКЦИИ МИКОТОКСИНОВ

ГРИБОВ РОДА FUSARIUM

Проведена оценка устойчивости эндофитных штаммов Bacillus subtilis к соединениям, продуци руемым фузариевыми грибами, по способности к росту на среде, содержащей метаболиты этого гриба. Все исследованные штаммы, в целом, проявляли устойчивость к метаболитам фитопа тогена, что проявлялось в способности к росту на среде с токсинами. Интересной закономерно стью оказалось то, что низкие концентрации токсинов способствовали уменьшению площади зоны роста всех штаммов по сравнению с контролем. При этом увеличение доли культурального фильтрата гриба до 50% в случае всех штаммов, кроме 11РН, стимулировало рост культуры бак терий. Приведенные результаты свидетельствуют о том, что исследованные эндофитные штам мы В. subtilis обладают устойчивостью к токсинам, продуцируемым Fusarium sporotrichioides, и защищают проростки при их воздействии.

Ключевые слова: эндофитные штаммы, бактерии-антагонисты, метаболиты, деструкция, Fusarium, микотоксины.

Согласно представлениям классической фи- являясь природными соединениями, токсины топатологии, токсины, продуцируемые фитопа- грибов подвергаются биодеградации. Поскольку тогенными грибами, необходимы им для деструк- сами растения подвержены отрицательному воз ции растительных тканей;

многие из них, в том действию вторичных метаболитов микромицетов, числе фузариотоксины, являются неспецифиче- наиболее перспективными для поиска деструк скими. У растений редко развивается устойчи- торов фитотоксинов являются бактерии, стиму вость к этим соединениям, но, с другой стороны, лирующие рост растений (PGPB, plant growth promoting bacteria) и особенно эндофитные ставлена спорами, т. е. покоящейся формой, что представители, благодаря их локализации внутри свидетельствует, с одной стороны, о том, что ме растительных тканей и, соответственно, возмож- таболиты гриба делают среду неблагоприятной ности деструкции токсинов даже после проникно- для роста, а с другой — об определенной толе вения последних в растения. Однако, токсические рантности клеток штаммов к токсинам, поскольку соединения, продуцируемые грибами, могут так- процесс спорообразования занимает несколько же ингибировать рост и развитие бактерий, что часов. Об этом же свидетельствует и отсутствие следует учитывать. В связи с этим первоначаль- в препаратах лизированных клеток и наличие ной задачей нашей работы была оценка устойчи- у большинства штаммов некоторого количества вости эндофитных штаммов Bacillus subtilis Cohn вегетативных клеток. У таких штаммов, как 11ВМ, Оценка устойчивости бацилл к соединениям, гетативные клетки:споры можно оценить как 1:9, продуцируемым Fusarium sporotrichioides Sherb., в то время как у штамма 89РН количество вегета проводилась по способности к росту на среде, со- тивных клеток было около 40%, а у штамма 26Д держащей метаболиты этого гриба. Для получе- достигало 50 — 60%. Только в культуре штамма ния метаболитов микромицета его культивирова- 49РН вегетативных клеток не наблюдалось вооб ли на двухслойном картофельно-глюкозном агаре ще. Не исключено, что относительно более вы (КГА), после чего удаляли верхний слой с культу- сокая устойчивость штамма 26Д компенсирует рой гриба, а на нижний, в который диффундиро- его сравнительно слабую антагонистическую ак вали продуцируемые им соединения, помещали тивность по отношению к этому и другим фито агаровые блоки с культурой бактерий. Кроме того, патогенным грибам. Это также может объяснять культуральный фильтрат F. sporotrichioides по- тот факт, что, будучи слабым антагонистом, этот лучали в процессе глубинного культивирования штамм гораздо лучше выживает в почвенных ус микромицета на картофельном отваре с глюкозой ловиях по сравнению со штаммом 49РН, который, (2%). Жидкую культуру пропускали через мем- несмотря на высокую антагонистическую актив бранные фильтры Millipore с диаметром пор 0,22 ность, в почве выживает плохо (Лукьянцев, 2010).

мкм, после чего стерильную культуральную жид- Интересно, что устойчивость бацилл к метаболи кость добавляли к КГА в различных соотношени- там F. sporotrichioides, продуцируемым при глу ях и помещали на поверхность среды агаровые бинном культивировании сильно отличалась от блоки с культурой В. subtilis. Ингибирующее дей- описанного выше случая. Данные представлены ственно по площади зоны роста бактерий вокруг Все исследованные штаммы, в целом, прояв В. subtilis (11РН, 49РН, 89РН, 118РН, 11ВМ и 26Д) с токсинами. Интересной закономерностью оказа к воздействию метаболитов F. sporotrichioides по- лось то, что низкие концентрации токсинов спо казала, что за 7 суток роста этот гриб продуцирует собствовали уменьшению площади зоны роста такое количество токсичных соединений, которое всех штаммов по сравнению с контролем. При сильно ингибирует рост бацилл (табл.). Вокруг этом увеличение доли культурального фильтра блоков с культурой всех штаммов отсутствовала та гриба до 50% в случае всех штаммов, кроме зона роста, однако, нельзя сказать, что токсины 11РН, стимулировало рост культуры бактерий.

щью микроскопии было выявлено, что большая так и низкими концентрациями культурального часть культуры каждого из штаммов была пред- фильтрата F. sporotrichioides может объясняться Таблица. Влияние культурального фильтрата F. sporotrichioides на рост эндофитных штаммов В. subtilis (в % к кон тролю)Table. The influence of cultural filtrates F. sporotrichioides on the growth of endophytic strains В. subtilis ( in % to control) * количество (по объему) культурального фильтрата F. sporotrichioides, добавленного в агаризованную среду, на которой выращивали бацилл.

Уразбахтина Д. Р., Егоршина А. А., Хайруллин Р. М. Анализ способности ферментных систем эндофитных штаммов Bacillus subtilis к деструкции микотоксинов грибов рода Fusarium.

тем, что используемый в работе изолят гриба был имуществом при взаимодействии с бактериями.

выделен из зерна растений ржи, обработанных Приведенные результаты свидетельствуют препаратом этого штамма. Это позволяет предпо- о том, что исследованные эндофитные штам лагать, что либо после обработки бациллой в зер- мы В. subtilis обладают устойчивостью к токси не осталась только изначально более устойчивая нам, продуцируемым F. sporotrichioides и F. poae, к воздействию штамма 11РН популяция фитопа- и защищают проростки при их воздействии, что тогена (одним из преимуществ которой является с большой вероятностью позволяет предполагать способность к продукции специфического набора наличие у бацилл способности к деградации неко или более высоких концентраций определенных торых фузариотоксинов.

токсинов), либо такая селекция на устойчивость Для доказательства этого предположения ме произошла после обработки в процессе двусто- тодом ВЭЖХ мы анализировали влияние клеток роннего антагонизма этих микроорганизмов. штамма В. subtilis 11РН на содержание Т-2 токси Если верно второе, то это означает, что быстрая на в среде. Установлено, что через 1 час инкубации адаптация фитопатогенных грибов может проис- живых клеток бактерий с Т-2 токсином наблюда ходить не только к химическим веществам, ис- лось почти шестикратное снижение его концентра пользуемым в качестве фунгицидов, но и к бакте- ции по сравнению с вариантом, в котором токсин риям, осуществляющим биоконтроль. При этом инкубировали с клетками, предварительно убитыми изменяющаяся или усиливающаяся продукция автоклавированием. Таким образом, мы впервые по токсинов оказывается не только фактором пато- казали, что изученный эндофитный штамм бакте генности/вирулентности, но и конкурентным пре- рий способен к деструкции фузариотоксинов in vivo.

Литература Лукьянцев М. А. Особенности биологической активности эндофитных штаммов Bacillus subtilis Cohn c различ ной степенью антагонизма к фитопатогенным грибам // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Саратов, 2010, 24 с.

ANALYSIS OF BACILLUS SUBTILIS ENDOPHYTIC STRAINS ENZYME SYSTEM' S

ABILITY TO DESTRUCT MYCOTOXINES OF FUSARIUM FUNGI

Institute of Biochemistry and Genetics of Ufa Scientific Centre of Russian Academy of Sciences, We apprised the stability of endophytic Bacillus subtilis strains to the combination produced by Fusarium fungi to the ability of growth in the medium including metabolites of these fungi. In the whole all researched strains showed the stability to plant pathogenic metabolites that is showed in ability to the growth in the toxin medium. We found interesting regularity that in comparison with the control low toxin concentrations furthered the reduction of the area of all strain’s growth. By the way in case of all strains except 11PH the increase of the fungal cultural filtrate volume up to 50% stimulated the growth of bacteria. The mentioned results indicate that the researched endophytic strains B. subtilis have the stability to toxins produced by F. sporotrichioides and F. poae and under the influence of them defend acrospires.

Key words: endophytic strains, bacteria-antogonists, metabolites, destruction, Fusarium fungi, mycotoxins.

МИЦЕЛИАЛЬНЫЕ ГРИБЫ КАК ИСТОЧНИКИ

ПОЛУЧЕНИЯ НОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

С ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЙ, АНТИРАКОВОЙ

И РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЙ АКТИВНОСТЯМИ

ФГБУ науки Институт микробиологии им. С. Н. Виноградского Российской академии наук, Доклад посвящен новой отрасли медицины — фармакологической микологии и медицин ским препаратам из грибов, активное начало которых рассматривается с позиций химии природных соединений. Основное внимание уделяется полисахаридам грибов и созданным на их основе лекарственным средствам, обладающим иммуномодулирующей, антираковой и ранозаживляющей активностями. Рассматриваются также последние данные о медицин ском значении липидов грибов, в том числе эссенциальных жирных кислот и каротиноидов.

Особо подчеркивается прогрессивное значение биотехнологий для создания лекарственных препаратов из грибов. В заключении отмечается перспективность биологически активных веществ грибов, с точки зрения их использования в современной медицине.

Ключевые слова: грибы, биотехнология, ранозаживляющие препараты, иммуномодуляторы, антиканцерогенные вещества.

Грибы (Eumycota) отличаются от других сивные источники получения эссенциальных организмов особым свойством — гетерогенно- жирных кислот — линолевой и линоленовой, стью своих физиолого-биохимических свойств. а также арахидоновой. Эти свойства грибов, а так Другими словами, определенные систематиче- же их способность наращивать при глубинном ские группы грибов более близки растениям, культивировании большие объемы биомассы за это — Ascomycetes и особенно Basidiomycetes, а, сравнительно короткие сроки ферментаций, воз например, Zygomycetes и, в частности, Mucorales можность использовать дешевые среды (отходы значительно ближе к животным. Так, базидиаль- других производств), получать во время одной ные грибы, как и растения, продуцируют бета- ферментации несколько конечных продуктов, не инсодержащие липиды, сахарозу, нециклические ограниченность производства и их экологическая полиолы, холодовые стресс-белки дегидрины. А чистота. Все это способствовало тому, что именно мукоровые грибы не имеют этих соединений, но грибы заняли первое место, как наиболее исполь в составе их липидного бислоя есть фосфолипид зуемые продуценты в биотехнологических произ сфингомиелин, который свойственен только жи- водствах.

вотным. Кроме того, грибы имеют ряд черт, сбли- В свою очередь, развитию таких биотехноло жающих их с прокариотами — это способность гий способствовали данные о том, что грибы могут при стрессовых воздействиях, например, при не- служить источниками для получения ценных ме достатке влаги образовывать покоящиеся клетки, дицинских препаратов. Эта отрасль биотехноло называемые спорами, длительное время сохраня- гии заняла в медицине к концу 19 столетия такую ющие в условиях стресса жизнеспособность. прочную позицию, что выделилась в отдельную Гетерогенность физиолого-биохимических дисциплину, называемую фармацевтической ми свойств грибов оказалась очень удобным свой- кологией. Созданию этой отрасли медицинской ством для биотехнологов, так как из этих низших индустрии способствовали также значительные эукариотов оказалось возможным получать био- успехи в изучении химии природных соединений логически активные вещества (БАВ), продуцен- грибов и установление связи между определен тами которых ранее были животные, растения ными БАВ и их медицинским использованием.

и бактерии. Например, такие гормоны растений Появилась даже возможность прогнозировать как гиббереллины, абсцизин и фузикокцин, те- препараты с определенными медицинскими свой перь получают из гриба Fusarium moniliforme, ствами в зависимости от химической формулы Fusicoccum amygdale и др. Ликопин, который активного начала, например, с регенерирующей ранее получали из томатов, теперь получают из активностью, тромболитическим действием, ан мукорового гриба Blakeslea trispora. Этот же гриб тибактериальной активностью в отношении пато служит продуцентом при получении провита- генной микрофлоры и др.

мина А — -каротина. В последнее десятилетие В последние годы микологи, химики природ грибы рассматриваются как наиболее прогрес- ных соединений, медики и биотехнологи, которые Феофилова Е. П. Мицелиальные грибы как источники получения новых лекарственных препаратов с иммуномодулирующей, антираковой и ранозаживляющей активностями.

теперь совместно создают новые медицинские 4. получение антиоксидантов — каротиноидов препараты, обратили особое внимание на имму- (-каротина, ликопина) с целью их использо номодулирующую активность лекарственных вания в антиканцерогенной терапии и косме средств, получаемых из грибов. Согласно совре- тологии;

менным данным, иммуномодуляторами считают 5. рассматриваются основные этапы биотехно любые вещества, которые оказывают стимулиру- логических процессов, направленных на по ющее, супрессирующее или регуляторное воздей- лучение лекарственных препаратов из мице ствие на иммунную систему, а иммунный ответ лиальных грибов: современные требования организма направлен на поддержание генетиче- к получению спорового посевного материала, ского постоянства его внутренней среды (гомео- способы его активации и хранения, метод под стаза). Лекарственные вещества могут оказывать ращивания спор и добавление стимуляторов как специфический, так и неспецифический им- прорастания;

оптимизация процесса фермен муномодулирующий эффект, и в этом отношении тации, в частности сокращение времени это в последнее время особый интерес вызывают ми- го процесса и его удешевление. Приводятся целиальные грибы, особенно Basidiomycetes, кото- данные о современных способах и аппаратуре рые с давних пор используются в традиционной процесса химочистки биологически активных восточной медицине как лекарственные средства. веществ грибов.

Так, наиболее достоверные сведения о лечебном Необходимо подчеркнуть особое значение действии грибов встречаются более 3000 лет назад, базидиомицетов в создании новых лекарствен и такими грибами являются Fomes fomentarius, ных препаратов. В настоящее время эти грибы Calvatia gigantea, Laricifomes officinalis, Amanita рассматривают не только с позиций их пищевой muscaria, Claviceps purpurea, Morchella esculenta ценности, но и как источники для получения БАВ, и др. В прошлом веке среди грибов в народной которые можно использовать как иммуностиму медицине наибольшей популярностью пользова- ляторы, адаптогены, антиканцерогены, соеди лись грибы Inonotus obliquus и Piptoporus betulinus, нения, поддерживающие состояние гомеостаза, которые применяли как ранозаживляющие и про- регуляторы биоритмов, сердечной деятельности, тивоопухолевые средства. Позже предположили, они оказывают гиполипидемический, антискле что эти грибы обладают и достаточно выражен- ротический, тромболитический, гипотензивный ной иммуномодулирующей активностью. В 19-м и антибиотический эффекты.

веке интерес стали вызывать другие грибы, тоже Исследования лечебных свойств базидиоми оказывающие благоприятные лечебные эффекты. цетов показали, что наиболее значимые результа Это Lentinus edodes, Pleurotus ostreatus, Ganoderma ты получены с полисахаридами, оказывающими sp., Volvariella volvacea, Flammulina velutipes и др. иммуномодулирующую и антираковую активно Но, уже в это время, медицинское использование сти. Среди всех биологических молекул именно этих грибов осуществлялось параллельно с уста- полисахариды имеют наибольшую способность новлением связи между лечебным эффектом к передаче информации, так как олигосахариды и химическим строением активного начала лекар- и полисахариды способны к многочисленным ства. В дальнейшем, при изложении современных интерконверсиям за счет разветвленной и линей данных о лекарственных препаратах из грибов ной структуры. Эта громадная потенциальная ва мы считали целесообразным следовать указанной риабельность обеспечивает функционирование Рассмотрены современные биотехнологии по- цессах клеточных взаимодействий.

1. полисахаридов и связанных с ними белков, активных веществ (БАВ) грибов малоизвестен.

обладающих иммуномодулирующим, анти- Но предполагают, что полисахариды, полисаха раковым эффектами и ранозаживляющей ак- рид-белковые комплексы и другие БАВ грибов об тивностью (аминополисахаридов — хитина ладают не «точечным» действием, а способностью и хитозана, глюканов, мукорана, уроновых активировать иммунную систему, увеличивая, кислот). Рассматривается современное значе- таким образом, потенциал защитной активности ние ранозаживляющих препаратов для лече- организма. Вещества грибов рассматривают как ния пролежней и незаживающих ран у боль- мультицитокининовые индукторы, вызывающие 2. использование липидов грибов для создания время, многие БАВ грибов являются антиоксидан медицинских препаратов, содержащих эссен- тами, перехватчиками свободных радикалов.

циальные жирные кислоты и убихинон Q-9;

Следует отметить и тот факт, что лекарствен 3. использование трегалозы в офтальмологии ные препараты, полученные из грибов, в частно для лечения синдрома «сухих глаз»;

сти антиканцерогенные и иммуномодулирующие, имеют более низкую стоимость, чем их аналоги, рода фузариум. В косметике Европы начинают синтезированные химическим способом. Кро- использовать мыла с запахом свежих грибов, об ме того, БАВ грибов не оказывают токсического условленный присутствием оптически активного действия, которое отмечается при прохождении спирта 1-октен-3-ола.

курса химиотерапии. Следует также указать и на Таким образом, сбываются предсказания новые направления в использовании грибов, так, наиболее известного английского журнала «The в последнее время в косметике все шире исполь- Lancet», который еще в 1925 году писал о том, что зуются экстракты из мицелия грибов и их культу- медицинские свойства грибов представляют со ральные жидкости для создания кремов и мазей. бой неиссякаемый источник для новых терапев Одним из таких косметических средств является тических исследований.

«Флоровит», созданный на основе БАВ грибов

MYCELIAL FUNGI AS SOURCES OF NOVEL DRUG PREPARATIONS

WITH IMMUNOMODULATORY, ANTICARCINOGENIC,

AND WOUND-HEALING ACTIVITIES

The presentation is concerned with a novel area of medicine referred to as pharmacological mycology. It also deals with medicinal preparations from fungi whose biologically active substances are considered in terms of chemistry of natural compounds. Special attention is given to fungal polysaccharides that are characterized by immunomodulatory, anticarcinogenic, and wound healing activity. Recent data on the medical importance of fungal lipids including essential fatty acids and carotenoids are discussed. Emphasis is placed upon the potential impact of biotechnological methods of developing drug preparation from fungi. In conclusion, the potential value of fungal biologically active substances with respect to modern-day medicine is stressed.

Key words: fungi, biotechnologies, wound-healing preparations, immunomodulators, anticarcinogenic substances.

СОЗДАНИЕ ПРИРОДНЫХ КОСМЕТИЧЕСКИХ КОМПОЗИЦИЙ

НА ОСНОВЕ ЛИКОПИНА МИЦЕЛИАЛЬНЫХ ГРИБОВ

1 ФГБУН Институт микробиологии им. С. Н. Виноградского Российской академии наук, 2 ФБУН Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г. К. Скрябина РАН, 3 ФГБУН Институт органической химии им. Н. Д. Зелинского РАН, Москва, Россия Создано новое косметическое средство на основе природного ликопина гетероталличных му коровых грибов, получаемого биотехнологическим способом. Косметическое средство, кроме ликопина, содержит также БАВ грибов, обладающие антиоксидантным, антиканцерогенным, консервирующим, антидиабетическим эффектом, получаемые в течение одной ферментации из мицелия гриба совместно с ликопином, что обеспечивает получение более дешевого конеч ного продукта.

Ключевые слова: косметическое природное средство, биотехнологический способ, Blakeslea trispora, ликопин, эссенциальные жирные кислоты.

Феофилова Е. П., Гончаров Н. Г., Алехин А. И., Сергеева Я. Э., Мысякина И. С., Галанина Л. А., Кочкина Г. А., Усов А. И.

Создание природных косметических композиций на основе ликопина мицелиальных грибов.

В связи с резкими изменениями температуры, методике, разработанной в лаборатории экспе загрязнением окружающей среды, увеличением риментальной эндокринной терапии опухолей в воздухе химических примесей от производств, РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН. Для сравнения более активным действием УФ-облучения все использовали пептидный гормон — аналог люли большее внимание в медицине уделяется пора- берина — сурфагон. Установлено, что торможение жениям кожного покрова, и, в связи с этим, соз- роста опухоли (ТРО) ликопином близко к показа данию более активных и дешевых средств кос- телю ТРО для сурфагона. Показана нетоксичность метики. При этом перспективными являются ликопина по данным суб- и острой токсичности.

косметические средства (КС), основанные на на- Получены новые данные о механизме дей туральных ингредиентах;

такая косметика клас- ствия ликопина на раковые клетки. На основании сифицируется как «органика» или «натуральная» исследования ДНК в клеточной популяции по фа и пользуется наибольшим спросом. Большинство зам клеточного цикла установлено, что процент косметических препаратов получают в настоящее анеуплоидных клеток и индекс пролиферации время из растительного и рыбного сырья. Их про- достоверно снижаются в фазах S и G2 +M, что изводство сопровождается такими отрицательны- может свидетельствовать о влиянии ликопина на ми факторами, как сезонность, нестабильность опухолевые клетки именно в эти фазы их разви урожаев, ограниченность производственных тия. В опытах на мышах по программе скрининга мощностей, отсутствие возможности регуляции модификаторов биологических реакций в лабора выходов биологически активных веществ (БАВ) тории комбинированной терапии опухолей НИИ и др. Этих недостатков лишены предлагаемые ЭДиТО ГУ РОНЦ РАМН подтверждено проти нами способы биотехнологического получения воопухолевое действие ликопина, и высказано КС из мицелиальных грибов, в частности, из му- предположение, что его опухолеингибирующий коровых грибов — Blakeslea trispora Thaxt. Кроме эффект реализуется за счет иммуномодификации.

того, эти грибы содержат соединения, необходи- Проведена всесторонняя оценка 2% ликопина на мые для создания КС — антиоксиданты, пигмент- аллергизирующее и мутагенное действие. Резуль ные вещества, липидные добавки и др., многие из таты постановки соответствующих тестов позво которых получают в настоящее время из расте- ляют сделать однозначный вывод о том, что 2% ний. Эти БАВ из грибов можно получить одновре- ликопин не обладает ни мутагенной, ни аллерги менно в одной ферментации, не выделяя их как зирующей активностями.

самостоятельные соединения, что значительно Учитывая способность ликопина задержи удешевляет стоимость конечного продукта. В КС вать рост раковых клеток, благодаря его высокой необходимо добавлять консерванты, а в мицелии антиоксидантной активности, этот каротиноид грибов содержится природный консервант — в последние годы стал активно применяться в об дисахарид трегалоза, который применяется как ласти косметики, а именно, в наиболее востребо консервирующий препарат в ряде производств. ванной области — онкокосметике. На основе ска Особую ценность представляют КС из грибов, занного выше, нами создано новое косметическое содержащие природные антиоксиданты, облада- средство, включающее антиоксиданты (основ ющие противораковой активностью, в частности, ной — ликопин), эссенциальные жирные кисло В Институте микробиологии им. С. Н. Вино- и эйкозапентаеновую, убихинон Q9, фосфолипи градского РАН разработан биотехнологический ды, триацилглицерины, консерванты (трегалозу), способ получения ликопина из мукорового гри- т. е. антидиабетические и антиканцерогенные сое ба B. trispora, апробированный на заводе «Урал- динения, среди которых основная роль принадле биофарм», и на его основе создан препарат «Ми- жит ликопину.

коликопин» (Феофилова и др., 2000). Активным На основе созданной биотехнологии, ука началом этого препарата является один из самых занный выше состав нового КС можно изменять, мощных природных антиоксидантов — ликопин, регулируя содержание убихинона, ликопина, основную ценность которого определяет его ан- каротина, фосфолипидов, например, фосфати тираковая активность, впервые установленная на дилэтаноламина. Предварительные испытания раке предстательной железы, и далее показанная показали, что созданное КС устраняет излишнее на моделях других раковых опухолей. Для установ- шелушение эпидермиса губ, придает им розовую ления этой антиканцерогенной способности лико- окраску, устраняет образование трещин и пре пина в течение трех лет проводились испытания дотвращает возникновение герпеса. В настоящее его противоопухолевого эффекта на животных — время планируется проведение более подробных крысах-самцах линии ACI с перевитой опухолью испытаний нового косметического средства в он аденокарциномы предстательной железы, полу- кодерматологическом отделении Центральной ченной из индуцированных новообразований по клинической больницы РАН.

Литература Феофилова Е. П., Терешина В. М., Меморская А. С., Вакулова Л. А., Шашкина М. Я. Способ получения биоло гически активного средства // Патент РФ № 2166868 от 11. 07. 2000 г.

CREATING OF NATURAL COSMETIC FORMULATIONS BASED

ON LYCOPENE OF FILAMENTOUS FUNGI

1 Instituteof Microbiology, Russian Academy of Sciences, Moscow, Russia, feofiliv@inmi. host.ru 2 Skryabin Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms (IBPM RAS), Puschino, Moscow reg., Russia A new natural cosmetic preparation has been developed on the basis of the lycopene of heterothallic mucoralean fungi that is obtained using a biotechnological method. The cosmetic preparation, apart from lycopene, contains fungal biologically active substances. They possess antioxidant, anticarcinogenic, preservative, antidiabetic properties. Since these substances are obtained during a single fermentation process together with lycopene, the final product is relatively inexpensive.

Key words: natural cosmetic formulations, biotechnological method, Blakeslea trispora, lycopene, essential fatty acids.

ОСОБЕННОСТИ БИОТЫ АФИЛЛОФОРОИДНЫХ ГРИБОВ НА

АНТРОПОГЕННЫХ ТЕРРИТОРИЯХ РИЦИНСКОГО РЕЛИКТО

ВОГО НАЦИОНАЛЬНОГО ПАРКА РЕСПУБЛИКИ АБХАЗИЯ

В настоящей работе рассматривается видовой состав ксилотрофных грибов на антропогенной территории Рицинского Реликтового Национального парка Республики Абхазия. Определена экологическая структура микобиоты, выявлена ее биоиндикационная особенность в условиях рекреационной нагрузки. В связи с деградацией растительного сообщества произошли измене ния и в структуре микобиоты. Это связано со снижением биоразнообразия видов грибов, увели чением синантропных видов и их включением в непосредственную природную среду, подвер женную рекреационному воздействию.

Ключевые слова: ксилотрофы, биоразнообразие, антропогенные территории, индикаторы, синан тропные виды, рекреационная нагрузка.



Pages:     | 1 |   ...   | 15 | 16 || 18 | 19 |   ...   | 21 |
 




Похожие материалы:

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Российская академия сельскохозяйственных наук Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт электрификации сельского хозяйства (ГНУ ВИЭСХ) Московский государственный агроинженерный университет им. В.П. Горячкина (МГАУ) Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт механизации сельского хозяйства (ГНУ ВИМ) ЭНЕРГООБЕСПЕЧЕНИЕ И ЭНЕРГОСБЕРЕЖЕНИЕ В СЕЛЬСКОМ ХОЗЯЙСТВЕ ...»

«Российская академия сельскохозяйственных наук Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт электрификации сельского хозяйства (ГНУ ВИЭСХ) Московский государственный агроинженерный университет им. В.П. Горячкина (МГАУ) ФГНУ Российский научно-исследовательский институт информации и технико-экономических исследований по инженерно-техническому обеспечению АПК (ФГНУ РОСИНФОРМАГРОТЕХ) ЭНЕРГООБЕСПЕЧЕНИЕ И ...»

«Российская академия сельскохозяйственных наук Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт электрификации сельского хозяйства (ГНУ ВИЭСХ) Московский государственный агроинженерный университет им. В.П. Горячкина (МГАУ) ФГНУ Российский научно-исследовательский институт информации и технико-экономических исследований по инженерно-техническому обеспечению АПК (ФГНУ РОСИНФОРМАГРОТЕХ) ЭНЕРГООБЕСПЕЧЕНИЕ И ...»

«Российская академия сельскохозяйственных наук Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт электрификации сельского хозяйства (ГНУ ВИЭСХ) Московский государственный агроинженерный университет им. В.П. Горячкина (МГАУ) ФГНУ Российский научно-исследовательский институт информации и технико-экономических исследований по инженерно-техническому обеспечению АПК (ФГНУ РОСИНФОРМАГРОТЕХ) ЭНЕРГООБЕСПЕЧЕНИЕ И ...»

«Российская академия сельскохозяйственных наук Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт электрификации сельского хозяйства (ГНУ ВИЭСХ) Московский государственный агроинженерный университет им. В.П. Горячкина (МГАУ) ФГНУ Российский научно-исследовательский институт информации и технико-экономических исследований по инженерно-техническому обеспечению АПК (ФГНУ РОСИНФОРМАГРОТЕХ) Открытое акционерное ...»

«МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ АГРОХИМИИ им. Д. Н. ПРЯНИШНИКОВА ПОЧВЕННЫЙ ИНСТИТУТ им. В. В. ДОКУЧАЕВА УТВЕРЖДАЮ УТВЕРЖДАЮ Министр сельского хозяйства Президент Российской академии Российской Федерации сельскохозяйственных наук _А. В. Гордеев _Г. А. Романенко 24 сентября 2003 г. 17 сентября 2003 г. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ПРОВЕДЕНИЮ КОМПЛЕКСНОГО МОНИТОРИНГА ПЛОДОРОДИЯ ПОЧВ ...»

«МЕЛИОРАЦИЯ: ЭТАПЫ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ Материалы международной научно- производственной конференции Москва 2006 РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт гидротехники и мелиорации имени А.Н.Костякова МЕЛИОРАЦИЯ: ЭТАПЫ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ Материалы международной научно-производственной конференции, посвященной 40-летию начала осуществления широкомасштабной программы мелиорации Москва 2006 УДК 631.6 М 54 ...»

«ПЧЕЛОВОДСТВО А.Г МЕГЕДЬ В.П. ПОЛИЩУК Допущено Государственным агропромышленным комитетом Украинской ССР в качестве учебника для средних специальных учебных заведений по специальностям Пчеловодство и Зоотехния Киев Выща школа 1990 ББК 46.91я723 М41 УДК 638.1(075.3) Рецензенты: преподаватель М. И. Совкунец (Борзнянский совхоз-техникум Черни говской области), И. Ф. Доля (заведующий пчелофермой Республиканского учеб но-производственного комбината по пчеловодству) Переведено с издания: Мегедь О. Г., ...»

«Санкт-Петербургский государственный университет. Институт наук о Земле ГНУ Центральный музей почвоведения им. В.В. Докучаева ГНУ Почвенный институт им. В.В. Докучаева Фонд сохранения и развития научного наследия В.В. Докучаева Общество почвоведов им. В.В. Докучаева МАТЕРИАЛЫ Международной научной конференции XVII Докучаевские молодежные чтения посвященной 110-летию Центрального музея почвоведения им. В.В. Докучаева НОВЫЕ ВЕХИ В РАЗВИТИИ ПОЧВОВЕДЕНИЯ: СОВРЕМЕННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ КАК СРЕДСТВА ПОЗНАНИЯ ...»

«Санкт-Петербургский государственный университет ГНУ Центральный музей почвоведения им. В.В. Докучаева Россельхозакадемии ГНУ Почвенный институт им. В.В. Докучаева Россельхозакадемии Фонд сохранения и развития научного наследия В.В. Докучаева Общество почвоведов им. В.В. Докучаева МАТЕРИАЛЫ Международной научной конференции XVI Докучаевские молодежные чтения посвященной 130-летию со дня выхода в свет книги Русский чернозем В.В. Докучаева ЗАКОНЫ ПОЧВОВЕДЕНИЯ: НОВЫЕ ВЫЗОВЫ 4– 6 марта 2013 года ...»

«Санкт-Петербургский государственный университет ГНУ Центральный музей почвоведения им. В.В. Докучаева Россельхозакадемии ГНУ Почвенный институт им. В.В. Докучаева Россельхозакадемии Фонд сохранения и развития научного наследия В.В. Докучаева Общество почвоведов им. В.В. Докучаева МАТЕРИАЛЫ Международной научной конференции XV Докучаевские молодежные чтения посвященной 150-летию со дня рождения Р.В. Ризположенского ПОЧВА КАК ПРИРОДНАЯ БИОГЕОМЕМБРАНА 1– 3 марта 2012 года Санкт-Петербург ...»

«Санкт-Петербургский государственный университет ГНУ Центральный музей почвоведения им. В.В. Докучаева Россельхозакадемии ГНУ Почвенный институт им. В.В.Докучаева Россельхозакадемии Фонд сохранения и развития научного наследия В.В. Докучаева Общество почвоведов им. В.В. Докучаева МАТЕРИАЛЫ Всероссийской научной конференции XIV Докучаевские молодежные чтения посвященной 165-летию со дня рождения В.В.Докучаева ПОЧВЫ В УСЛОВИЯХ ПРИРОДНЫХ И АНТРОПОГЕННЫХ СТРЕССОВ 1– 4 марта 2011 года Санкт-Петербург ...»

«МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ДЕПАРТАМЕНТ НАУЧНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙ ПОЛИТИКИ И ОБРАЗОВАНИЯ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ СЕВЕРО-ЗАПАДНАЯ ВЕТЕРИНАРНАЯ АССОЦИАЦИЯ МАТЕРИАЛЫ МЕЖДУНАРОДНОЙ НАУЧНОЙ КОНФЕРЕНЦИИ СТУДЕНТОВ, АСПИРАНТОВ И МОЛОДЫХ УЧЕНЫХ ЗНАНИЯ МОЛОДЫХ ДЛЯ РАЗВИТИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ И АПК СТРАНЫ Санкт-Петербург 2012 1 УДК: 619 (063) Материалы международной научной конференции студентов, аспи рантов и молодых ученых Знания ...»

«МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ ГРОДНЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ МАТЕРИАЛЫ ХІІ МЕЖДУНАРОДНОЙ СТУДЕНЧЕСКОЙ НАУЧНОЙ КОНФЕРЕНЦИИ (Гродно, 18-20 мая 2011 года) В ТРЕХ ЧАСТЯХ ЧАСТЬ 3 АГРОНОМИЯ ЗАЩИТА РАСТЕНИЙ ЗООТЕХНИЯ ВЕТЕРИНАРИЯ ТЕХНОЛОГИЯ ХРАНЕНИЯ И ПЕРЕРАБОТКИ ОБЩЕСТВЕННЫЕ НАУКИ К 60-летию вуза Гродно УО ГГАУ УДК 63 (06) ББК М Материалы ХІІ Международной студенческой научной конференции. – Гродно, 2011. – ...»

«Казанский (Приволжский) федеральный университет Общество почвоведов им. В.В. Докучаева Институт проблем экологии и недропользования АН РТ НАСЛЕДИЕ И.В. ТЮРИНА В СОВРЕМЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЯХ В ПОЧВОВЕДЕНИИ Материалы международной научной конференции Казань, 15-17 октября 2013 г. И.В.Тюрин (1892-1962) Казань 2013 УДК 631.4 ББК 40.3 Печатается по решению Ученого совета Института фундаментальной медицины и биологии ФГБОУ ВПО Казанский (Приволжский) федеральный университет Наследие И.В. Тюрина в ...»

«ISSN 1561-1124 МАТЕРИАЛЫ ПО ИЗУЧЕНИЮ РУССКИХ ПОЧВ ВЫПУСК 7 (34) Издательство Санкт-Петербургского университета 2012 САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ КАФЕДРА ПОЧВОВЕДЕНИЯ И ЭКОЛОГИИ ПОЧВ ЦЕНТРАЛЬНЫЙ МУЗЕЙ ПОЧВОВЕДЕНИЯ ИМ. В.В.ДОКУЧАЕВА МАТЕРИАЛЫ ПО ИЗУЧЕНИЮ РУССКИХ ПОЧВ ВЫПУСК 7 (34) Издание основано в 1885 г. А.В. Советовым и В.В. Докучаевым Издательство С.-Петербургского университета 2012 УДК 631.4 ББК 40.3 М34 Редакционная коллегия: Б.Ф. Апарин (председатель), Е.В. Абакумов, ...»

«ISSN 1561-1124 МАТЕРИАЛЫ ПО ИЗУЧЕНИЮ РУССКИХ ПОЧВ ВЫПУСК 6 (33) Издательство Санкт-Петербургского университета 2009 САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ КАФЕДРА ПОЧВОВЕДЕНИЯ И ЭКОЛОГИИ ПОЧВ ЦЕНТРАЛЬНЫЙ МУЗЕЙ ПОЧВОВЕДЕНИЯ ИМ. В.В.ДОКУЧАЕВА МАТЕРИАЛЫ ПО ИЗУЧЕНИЮ РУССКИХ ПОЧВ ВЫПУСК 6 (33) Издание основано в 1885 г. А.В. Советовым и В.В. Докучаевым Издательство С.-Петербургского университета 2009 УДК 631.4 + 577.34 ББК 40.3 М34 Редакционная коллегия: И.А. Горлинский (председатель), Б.Ф. ...»

«X ДАЛЬНЕВОСТОЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ ПО ЗАПОВЕДНОМУ ДЕЛУ МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ 25-27 сентября 2013 г. г. Благовещенск АМУРСКИЙ ФИЛИАЛ БОТАНИЧЕСКОГО САДА-ИНСТИТУТА ДВО РАН АМУРСКИЙ ФИЛИАЛ WWF РОССИИ БЛАГОВЕЩЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ РОССИЙСКИЙ ФОНД ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ АМУРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ СОЦИАЛЬНО-ЭКОЛОГИЧЕСКОГО СОЮЗА АМУРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ РУССКОГО БОТАНИЧЕСКОГО ОБЩЕСТВА СОВЕТ МОЛОДЫХ УЧЕНЫХ АФ БСИ ДВО РАН X ДАЛЬНЕВОСТОЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ ПО ЗАПОВЕДНОМУ ДЕЛУ 25-27 сентября ...»

«МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГОУ ВПО УЛЬЯНОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ – ФИЛИАЛ ФГОУ ВПО УЛЬЯНОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ МАТЕРИАЛЫ IX МЕЖДУНАРОДНОЙ СТУДЕНЧЕСКОЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЙ КОНФЕРЕНЦИИ С МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ 31 марта 2011 Димитровград 2011 г. УДК 631 Редакционная коллегия: Главный редактор Х.Х. Губейдуллин Научный редактор Т.А. Мащенко Редакционная коллегия И.И. Шигапов А.М. Кадырова ...»






 
© 2013 www.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.